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"PROJECT":{"PROJECT_TITLE":"Fetal growth delay caused by loss of non-canonical imprinting is resolved late in pregnancy and culminates in offspring overgrowth","PROJECT_TYPE":"Targeted metabolomics","PROJECT_SUMMARY":"Germline epigenetic programming, including genomic imprinting, substantially influences offspring development. Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2) plays an important role in Histone 3 Lysine 27 trimethylation (H3K27me3)-dependent imprinting, loss of which leads to growth and developmental changes in mouse offspring. In this study, we show that offspring from mouse oocytes lacking the PRC2 protein Embryonic Ectoderm Development (EED) were initially developmentally delayed, characterised by low blastocyst cell counts and substantial growth delay in mid-gestation embryos. This initial developmental delay was resolved as offspring underwent accelerated fetal development and growth in late gestation resulting in offspring that were similar stage and weight to controls at birth. The accelerated development and growth in offspring from Eed-null oocytes was associated with remodelling of the placenta, which involved an increase in fetal and maternal tissue size, conspicuous expansion of the glycogen enriched cell population and delayed parturition. Despite placental remodelling and accelerated offspring fetal growth and development, placental efficiency and fetal blood glucose levels were low, and the fetal blood metabolome was unchanged. Moreover, while expression of the H3K27me3-imprinted gene and amino acid transporter Slc38a4 was increased, fetal blood levels of individual amino acids were similar to controls, indicating that placental amino acid transport was not enhanced. Genome-wide analyses identified extensive transcriptional dysregulation and DNA methylation changes in affected placentas, including a range of imprinted and non-imprinted genes. Together, while deletion of Eed in growing oocytes resulted in fetal growth and developmental delay and placental hyperplasia, our data indicate a remarkable capacity for offspring fetal growth to be normalised despite inefficient placental function and the loss of H3K27me3-dependent genomic imprinting.","INSTITUTE":"Hudson Institute of Medical Research","DEPARTMENT":"Centre for Reproductive Health","LAST_NAME":"Western","FIRST_NAME":"Patrick","ADDRESS":"27–31 Wright Street Clayton VIC 3168","EMAIL":"patrick.western@hudson.org.au","PHONE":"+61 3 8572 2700","PUBLICATIONS":"Ruby Oberin, Sigrid Petautschnig, Ellen G Jarred, Zhipeng Qu, Tesha Tsai, Neil A Youngson, Gabrielle Pulsoni, Thi T Truong, Dilini Fernando, Heidi Bildsoe, Rheannon O Blücher, Maarten van den Buuse, David K Gardner, Natalie A Sims, David L Adelson, Patrick S Western (2024) Fetal growth delay caused by loss of non-canonical imprinting is resolved late in pregnancy and culminates in offspring overgrowth eLife 13:e81875; https://doi.org/10.7554/eLife.81875","DOI":"http://dx.doi.org/10.21228/M8TR5T"},

"STUDY":{"STUDY_TITLE":"Fetal growth delay caused by loss of non-canonical imprinting is resolved late in pregnancy and culminates in offspring overgrowth","STUDY_SUMMARY":"Germline epigenetic programming, including genomic imprinting, substantially influences offspring development. Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2) plays an important role in Histone 3 Lysine 27 trimethylation (H3K27me3)-dependent imprinting, loss of which leads to growth and developmental changes in mouse offspring. In this study, we show that offspring from mouse oocytes lacking the PRC2 protein Embryonic Ectoderm Development (EED) were initially developmentally delayed, characterised by low blastocyst cell counts and substantial growth delay in mid-gestation embryos. This initial developmental delay was resolved as offspring underwent accelerated fetal development and growth in late gestation resulting in offspring that were similar stage and weight to controls at birth. The accelerated development and growth in offspring from Eed-null oocytes was associated with remodelling of the placenta, which involved an increase in fetal and maternal tissue size, conspicuous expansion of the glycogen enriched cell population and delayed parturition. Despite placental remodelling and accelerated offspring fetal growth and development, placental efficiency and fetal blood glucose levels were low, and the fetal blood metabolome was unchanged. Moreover, while expression of the H3K27me3-imprinted gene and amino acid transporter Slc38a4 was increased, fetal blood levels of individual amino acids were similar to controls, indicating that placental amino acid transport was not enhanced. Genome-wide analyses identified extensive transcriptional dysregulation and DNA methylation changes in affected placentas, including a range of imprinted and non-imprinted genes. Together, while deletion of Eed in growing oocytes resulted in fetal growth and developmental delay and placental hyperplasia, our data indicate a remarkable capacity for offspring fetal growth to be normalised despite inefficient placental function and the loss of H3K27me3-dependent genomic imprinting.","INSTITUTE":"Hudson Institute of Medical Research","DEPARTMENT":"Centre for Reproductive Health","LAST_NAME":"Western","FIRST_NAME":"Patrick","ADDRESS":"27–31 Wright Street Clayton VIC 3168","EMAIL":"patrick.western@hudson.org.au","PHONE":"+61 3 8572 2700","SUBMIT_DATE":"2024-05-15"},

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"COLLECTION":{"COLLECTION_SUMMARY":"Fetuses of mice embryo at E17.5 developmental stage were isolated from pregnant females and decapitated on ice. ~50ul blood was collected from each fetus using a pipette and transferred into tubes containing 2ul 0.5M EDTA. collected by centrifugation and frozen at -80C before metabolic analysis. Cardiac blood and serum samples were also collected from the mothers of each litter using the same approach.","SAMPLE_TYPE":"fetus blood or cardiac blood"},

"TREATMENT":{"TREATMENT_SUMMARY":"N/A"},

"SAMPLEPREP":{"SAMPLEPREP_SUMMARY":"A monophasic extraction protocol was used to extract the metabolites from the serum. To 20 µL of serum, 140 µL of chilled 6:1 MeOH/Milli-Q water containing 0.8 nmol of 13C515N valine and 0.8 nmol of 13C6 sorbitol was added. Each sample was vortexed and then incubated at 4°C for 10 min with continuous agitation (950 rpm) using an Eppendorf Thermomixer C. The samples were centrifuged at 4°C for 10 min at 12700 rpm using an Eppendorf centrifuge 5430 R. The supernatant was transferred into a fresh 1.5 mL Eppendorf tube and the cell debris was discarded. A 16 µL aliquot of each sample was pooled to create the pooled biological quality control (PBQC). Sixteen µL of each study sample and the PBQC were transferred into HPLC inserts and evaporated at 30 °C to complete dryness, using a CHRIST RVC 2-33 CD plus speed vacuum. To limit the amount of moisture present in the insert, 20 µL 100% methanol (LCMS grade) was added to each insert and evaporated using a speed vacuum."},

"CHROMATOGRAPHY":{"CHROMATOGRAPHY_SUMMARY":"The GC-MS system used comprised of an AOC6000 autosampler, a 2030 Shimadzu gas chromatograph and a TQ8050NX triple quadrupole mass spectrometer (Shimadzu, Japan)with an electron ionisation source(-70eV). The mass spectrometer was tuned according to the manufacturer’s recommendations using tris-(perfluorobutyl)-amine (CF43). GC-MS was performed on a 30m Agilent DB-5 column with 0.25mm internal diameter column and 1µm film thickness. The injection temperature (inlet) was set at 280°C, the MS transfer line at 280°C and the ion source adjusted to 200°C. Helium was used as the carrier gas at a flow rate of 1 mL/min and argon gas was used in the collision cell to generate the MRM product ion. The analysis of the derivatised samples was performed under the following oven temperature program; 100°C start temperature, hold for 4 minutes, followed by a 10°C/min oven temperature ramp to 320°C with a following final hold for 11 minutes.","INSTRUMENT_NAME":"Shimadzu GC-2030","COLUMN_NAME":"Agilent DB5-MS (30m x 0.25mm, 0.25um)","COLUMN_TEMPERATURE":"100 - 320","FLOW_GRADIENT":"N/A","FLOW_RATE":"1 mL/min","SOLVENT_A":"N/A","SOLVENT_B":"N/A","CHROMATOGRAPHY_TYPE":"GC"},

"ANALYSIS":{"ANALYSIS_TYPE":"MS"},

"MS":{"INSTRUMENT_NAME":"Shimadzu TQ8050NX","INSTRUMENT_TYPE":"Triple quadrupole","MS_TYPE":"EI","MS_COMMENTS":"The GC-MS system used comprised of an AOC6000 autosampler, a 2030 Shimadzu gas chromatograph and a TQ8050NX triple quadrupole mass spectrometer (Shimadzu, Japan)with an electron ionisation source(-70eV). The mass spectrometer was tuned according to the manufacturer’s recommendations using tris-(perfluorobutyl)-amine (CF43). GC-MS was performed on a 30m Agilent DB-5 column with 0.25mm internal diameter column and 1µm film thickness. The injection temperature (inlet) was set at 280°C, the MS transfer line at 280°C and the ion source adjusted to 200°C. Helium was used as the carrier gas at a flow rate of 1 mL/min and argon gas was used in the collision cell to generate the MRM product ion. The analysis of the derivatised samples was performed under the following oven temperature program; 100°C start temperature, hold for 4 minutes, followed by a 10°C/min oven temperature ramp to 320°C with a following final hold for 11 minutes.","ION_MODE":"POSITIVE"},

"MS_METABOLITE_DATA":{
"Units":"Relative abundance",

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