#METABOLOMICS WORKBENCH YowKeat_20231017_105244 DATATRACK_ID:4407 STUDY_ID:ST002939 ANALYSIS_ID:AN004824 PROJECT_ID:PR001828 VERSION 1 CREATED_ON October 24, 2023, 10:10 am #PROJECT PR:PROJECT_TITLE Role of PI3K in Atrial Myopathy: Insights from Transgenic Mouse Models and PR:PROJECT_TITLE Identification of a Dysregulated PI3K Lipid Profile in Individuals with Atrial PR:PROJECT_TITLE Fibrillation PR:PROJECT_SUMMARY In a serendipitous discovery, atrial enlargement, fibrosis and thrombi was PR:PROJECT_SUMMARY identified in a subset of transgenic mice with reduced phosphoinositide 3-kinase PR:PROJECT_SUMMARY (PI3K, class IA) in cardiac myocytes. Understanding mechanisms underlying atrial PR:PROJECT_SUMMARY myopathy has important implications for understanding and preventing atrial PR:PROJECT_SUMMARY fibrillation (AF). Prior work had shown that PI3K is an essential regulator of PR:PROJECT_SUMMARY exercise-induced ventricular enlargement and protection, but the role in the PR:PROJECT_SUMMARY atria was unknown. Further, while targeting IGF1-PI3K-Akt signaling has been PR:PROJECT_SUMMARY considered a potential therapeutic strategy for the failing heart, growing PR:PROJECT_SUMMARY evidence suggests fine-tuning IGF1-PI3K signaling would be necessary. Here, we PR:PROJECT_SUMMARY undertook comprehensive physiological and molecular analyses in cardiac-specific PR:PROJECT_SUMMARY transgenic mice with increased or decreased PI3K to assess the dose response PR:PROJECT_SUMMARY impact of directly regulating PI3K. Elevated PI3K was associated with a PR:PROJECT_SUMMARY dose-dependent increase in heart size, and preserved/enhanced function. In PR:PROJECT_SUMMARY contrast, reduced PI3K led to cardiac dysfunction, fibrosis, arrhythmia, and PR:PROJECT_SUMMARY increased susceptibility to atrial enlargement and thrombi. This phenotype was PR:PROJECT_SUMMARY associated with dysregulation of a lipid species (GM3) that regulates the PR:PROJECT_SUMMARY IGF1-PI3K pathway, cardiac stress and contractility genes. Proteomic profiling PR:PROJECT_SUMMARY identified distinct signatures across atria with varying degrees of atrial PR:PROJECT_SUMMARY dysfunction, enlargement, and presence of atrial thrombi. To assess the PR:PROJECT_SUMMARY potential relevance in humans we assessed circulating PI3K-related lipids in PR:PROJECT_SUMMARY plasma from athletes with/without AF. Dysregulation of GM3 and PI3K-related PR:PROJECT_SUMMARY lipids were identified in athletes with AF. Collectively, this work advances our PR:PROJECT_SUMMARY understanding of mechanisms underpinning atrial pathophysiology, offers new PR:PROJECT_SUMMARY insights for therapeutic approaches targeting atrial myopathy and AF, and has PR:PROJECT_SUMMARY identified potential new lipid markers for identifying individuals at risk of PR:PROJECT_SUMMARY AF. PR:INSTITUTE Baker Heart and Diabetes Institute PR:LABORATORY Metabolomics PR:LAST_NAME Tham PR:FIRST_NAME Yow PR:ADDRESS 75 Commercial Rd PR:EMAIL yowkeat.tham@baker.edu.au PR:PHONE 0430502623 #STUDY ST:STUDY_TITLE Role of PI3K in Atrial Myopathy: Insights from Transgenic Mouse Models and ST:STUDY_TITLE Identification of a Dysregulated PI3K Lipid Profile in Individuals with Atrial ST:STUDY_TITLE Fibrillation - Part 2 of 2, Mus musculus ST:STUDY_SUMMARY Lipidomic profiling was conducted on atrias and ventricles from 20 week old, ST:STUDY_SUMMARY male and female caPI3K and dnPI3K heterozygous and homozygous transgenic mice. ST:STUDY_SUMMARY These transgenic mice have cardiac specific overexpression of either a ST:STUDY_SUMMARY constitutively active PI3K transgene (to have increased PI3K activity in the ST:STUDY_SUMMARY heart, mimicking an athlete's heart) or dominate negative PI3K transgene (to ST:STUDY_SUMMARY have decreased PI3K activity in the heart, resulting in smaller hearts with ST:STUDY_SUMMARY increase susceptibility to a variety of cardiac insults). ST:INSTITUTE Baker Heart and Diabetes Institute ST:LABORATORY Metabolomics ST:LAST_NAME Tham ST:FIRST_NAME Yow ST:ADDRESS 75 Commercial Rd ST:EMAIL yowkeat.tham@baker.edu.au ST:NUM_GROUPS 6 ST:TOTAL_SUBJECTS 105 ST:NUM_MALES 46 ST:NUM_FEMALES 59 ST:PHONE 0430502623 #SUBJECT SU:SUBJECT_TYPE Mammal SU:SUBJECT_SPECIES Mus musculus SU:TAXONOMY_ID 10090 SU:GENOTYPE_STRAIN FVBN SU:AGE_OR_AGE_RANGE approx 20 weeks old SU:GENDER Male and female SU:ANIMAL_FEED Specialty Feeds Irradiated Rat and Mouse Standard Chow Diet #SUBJECT_SAMPLE_FACTORS: SUBJECT(optional)[tab]SAMPLE[tab]FACTORS(NAME:VALUE pairs separated by |)[tab]Raw file names and additional sample data SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 38850_V Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic RAW_FILE_NAME=MP22-032_01-096_S_E01-V089_V15.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 38865_V Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic RAW_FILE_NAME=MP22-032_01-018_S_E01-V016_V31.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 38866_V Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic RAW_FILE_NAME=MP22-032_01-012_S_E01-V011_V32.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 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38998_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-037_S_E01-V034_A068.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 38999_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-045_S_E01-V042_A069.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 39028_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-087_S_E01-V081_A082.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 39030_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-033_S_E01-V030_A084.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 39035_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-113_S_E01-V105_A089.d SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 39036_A Tissue:Atria | Sex:Female | Genotype:dnPI3K Tg (+/+) RAW_FILE_NAME=MP22-034_01-080_S_E01-V074_A090.d #COLLECTION CO:COLLECTION_SUMMARY Ventricles were dissected from mice such that each sample will include left and CO:COLLECTION_SUMMARY right ventricular tissue. Ventricles and atrias were snap frozen in liquid CO:COLLECTION_SUMMARY nitrogen and stored in -80 freezer until tissues were processed for lipid CO:COLLECTION_SUMMARY extractions CO:SAMPLE_TYPE Ventricles and Atria CO:STORAGE_CONDITIONS -80℃ #TREATMENT TR:TREATMENT_SUMMARY Mice did not undergo specific treatment, as this was a basal phenotyping study. TR:TREATMENT_SUMMARY Mice were fasted for 6 hours before dissections, and a lethal dose of anesthesia TR:TREATMENT_SUMMARY was delivered via intraperitoneal injection before tissue collection. TR:ANIMAL_ANESTHESIA Pentobarbitone TR:ANIMAL_FASTING 6 hours #SAMPLEPREP SP:SAMPLEPREP_SUMMARY Tissues were homogenised in 1xPBS and then sonicated with a probe-sonicator for SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 15 seconds, 23 amplitude. BCA assays were then conducted to determine protein SP:SAMPLEPREP_SUMMARY concentrations of these homogenates. Lipid extraction was conducted using 10ul SP:SAMPLEPREP_SUMMARY of sample (ventricle homogenate at 5mg/ml, atria homogenate at 2.5mg/ml) using SP:SAMPLEPREP_SUMMARY the single phase chloroform methanol method. 10ul of internal standards and SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 200ul of chloroform:methanol (1:2) were added to samples before the mixture was SP:SAMPLEPREP_SUMMARY vortexed. Samples were then placed on a rotary shaker for 10 mins at a speed of SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 90 before being transferred to a bath sonicator. Samples were then sonicated for SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 30 mins at water temperature below 28 degrees. Samples were then removed and SP:SAMPLEPREP_SUMMARY rested at room temperature for 20 mins. Samples were then centrifuged at SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 13000rpm for 10 minutes. 200ul of the supernatant was then transferred to 0.5ml SP:SAMPLEPREP_SUMMARY polypropylene 96 well plates, and spun dried using a speedvac vacuum SP:SAMPLEPREP_SUMMARY concentrator. Lipids were reconstituted in 50ul water saturated butanol + 50ul SP:SAMPLEPREP_SUMMARY of Ammonium Formate. SP:PROCESSING_STORAGE_CONDITIONS On ice SP:EXTRACT_STORAGE -80℃ #CHROMATOGRAPHY CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY The running solvent consisted of solvent A: 50% H2O / 30% acetonitrile / 20% CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY isopropanol (v/v/v) containing 10mM ammonium formate and 5uM medronic acid, and CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY solvent B: 1% H2O / 9% acetonitrile / 90% isopropanol (v/v/v) containing 10mM CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY ammonium formate. We utilized a stepped linear gradient with a 16-minute cycle CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY time per sample and a 1µL sample injection. To increase throughput, we used a CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY dual column set up to equilibrate the second column while the first is running a CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY sample. The sample analytical gradient was as follows: starting with a flow rate CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY of 0.4mL/minute at 15% B and increasing to 50% B over 2.5 minutes, then to 57% CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY over 0.1 minutes, to 70% over 6.4 minutes, to 93% over 0.1 minute, to 96% over CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY 1.9 minutes and finally to 100% over 0.1 minute. The solvent was then held at CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY 100% B for 0.9 minutes (total 12.0 minutes). Equilibration was started as CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY follows: solvent was decreased from 100% B to 15% B over 0.2 minutes and held CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY until a total of 16 minutes. The next sample is injected and the columns are CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY switched. CH:CHROMATOGRAPHY_TYPE Reversed phase CH:INSTRUMENT_NAME Agilent 1290 Infinity II CH:COLUMN_NAME Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (100 x 2.1mm,1.8um) CH:SOLVENT_A 50% water/30% acetonitrile/20% isopropanol; 10mM ammonium formate; 5uM medronic CH:SOLVENT_A acid CH:SOLVENT_B 1% water/9% acetonitrile/90% isopropanol; 10mM ammonium formate CH:FLOW_GRADIENT Starting with a flow rate of 0.4mL/minute at 15% B and increasing to 50% B over CH:FLOW_GRADIENT 2.5 minutes, then to 57% over 0.1 minutes, to 70% over 6.4 minutes, to 93% over CH:FLOW_GRADIENT 0.1 minute, to 96% over 1.9 minutes and finally to 100% over 0.1 minute. The CH:FLOW_GRADIENT solvent was then held at 100% B for 0.9 minutes (total 12.0 minutes). CH:FLOW_GRADIENT Equilibration was started as follows: solvent was decreased from 100% B to 15% B CH:FLOW_GRADIENT over 0.2 minutes and held until a total of 16 minutes. CH:FLOW_RATE 0.4mL/min CH:COLUMN_TEMPERATURE 45 #ANALYSIS AN:ANALYSIS_TYPE MS #MS MS:INSTRUMENT_NAME Agilent 6490 QQQ MS:INSTRUMENT_TYPE Triple quadrupole MS:MS_TYPE ESI MS:ION_MODE POSITIVE MS:MS_COMMENTS Details previously published in https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2018.10.008 MS:MS_COMMENTS Analysis of plasma extracts was performed on an Agilent 6490 QQQ mass MS:MS_COMMENTS spectrometer with an Agilent 1290 series HPLC system and a ZORBAX eclipse plus MS:MS_COMMENTS C18 column (2.1x100mm 1.8μm, Agilent) with the thermostat set at 60°C. Mass MS:MS_COMMENTS spectrometry analysis was performed in positive ion mode with dynamic scheduled MS:MS_COMMENTS multiple reaction monitoring (MRM). Mass spectrometry settings and MRM MS:MS_COMMENTS transitions for each lipid class, subclass and individual species are shown in MS:MS_COMMENTS Tables 1 and S1. The solvent system consisted of solvent A) 50% H2O / 30% MS:MS_COMMENTS acetonitrile / 20% isopropanol (v/v/v) containing 10mM ammonium formate and MS:MS_COMMENTS solvent B) 1% H2O / 9% acetonitrile / 90% isopropanol (v/v/v) containing 10mM MS:MS_COMMENTS ammonium formate. We utilized a stepped linear gradient with a 15-minute cycle MS:MS_COMMENTS time per sample and a 1μL sample injection. The gradient was as follows; MS:MS_COMMENTS starting with a flow rate of 0.4ml/minute at 10% B and increasing to 45% B over MS:MS_COMMENTS 2.7 minutes, then to 53% over 0.1 minutes, to 65% over 6.2 minutes, to 89% over MS:MS_COMMENTS 0.1 minute, to 92% over 1.9 minutes and finally to 100% over 0.1 minute. The MS:MS_COMMENTS solvent was then held at 100% B for 0.8 minutes (total 11.9 minutes). MS:MS_COMMENTS Equilibration was as follows, solvent was decreased from 100% B to 10% B over MS:MS_COMMENTS 0.1 minute and held for an additional 0.9 minutes. Flow rate was then switched MS:MS_COMMENTS to 0.6 ml/minute for 1 minute before returning to 0.4 ml/minute over 0.1 MS:MS_COMMENTS minutes. Solvent B was held at 10% B for a further 0.9 minutes at 0.4ml/minutes MS:MS_COMMENTS for a total cycle time of 15 minutes. The following mass spectrometer conditions MS:MS_COMMENTS were used; gas temperature, 150°C, gas flow rate 17L/min, nebulizer 20psi, MS:MS_COMMENTS Sheath gas temperature 200°C, capillary voltage 3500V and sheath gas flow MS:MS_COMMENTS 10L/min. Isolation widths for Q1 and Q3 were set to “unit” resolution (0.7 MS:MS_COMMENTS amu). PQC samples consisting of a pooled set of 6 healthy individuals were MS:MS_COMMENTS incorporated into the analysis at 1 PQC per 18 plasma samples. TQC consisted of MS:MS_COMMENTS PQC extracts which were pooled and split into individual vials to provide a MS:MS_COMMENTS measure of technical variation from the mass spectrometer only. These were MS:MS_COMMENTS included at a ratio of 1 TQC per 18 plasma samples. TQCs were monitored for MS:MS_COMMENTS changes in peak area, width and retention time to determine the performance of MS:MS_COMMENTS the LC-MS/MS analysis and were subsequently used to align for differential MS:MS_COMMENTS responses across the analytical batches. #MS_METABOLITE_DATA MS_METABOLITE_DATA:UNITS pmol/µmol of Total Phosphatidylcholine MS_METABOLITE_DATA_START Samples 38850_V 38865_V 38866_V 38883_V 38885_V 38886_V 38972_V 38974_V 39075_V 39079_V 38847_V 38846_V 38857_V 38863_V 38864_V 38971_V 38973_V 39006_V 39007_V 38848_V 38849_V 38855_V 38856_V 38858_V 38970_V 39008_V 39009_V 38882_V 38884_V 39070_V 39072_V 39073_V 39074_V 39078_V 39084_V 39086_V 39088_V 39140_V 39141_V 39071_V 39076_V 39077_V 39085_V 39087_V 39139_V 39142_V 38869_V 38870_V 38851_V 38842_V 38912_V 38913_V 38916_V 38964_V 38993_V 38994_V 38995_V 38996_V 39000_V 39001_V 39029_V 39031_V 39034_V 38854_V 38859_V 38860_V 38914_V 38915_V 38969_V 39004_V 39005_V 39026_V 38853_V 38852_V 38845_V 38843_V 38917_V 38965_V 38966_V 38967_V 38968_V 39002_V 39003_V 39027_V 38867_V 38871_V 38872_V 38878_V 38990_V 38991_V 38992_V 38997_V 39032_V 39033_V 38868_V 38877_V 38879_V 38880_V 38881_V 38998_V 38999_V 39028_V 39030_V 39035_V 39036_V 38850_A 38865_A 38866_A 38883_A 38885_A 38886_A 38972_A 38974_A 39075_A 39079_A 38847_A 38846_A 38857_A 38863_A 38864_A 38971_A 38973_A 39006_A 39007_A 38848_A 38849_A 38855_A 38856_A 38858_A 38970_A 39008_A 39009_A 38882_A 38884_A 39070_A 39072_A 39073_A 39074_A 39078_A 39084_A 39086_A 39088_A 39140_A 39141_A 39071_A 39076_A 39077_A 39085_A 39087_A 39139_A 39142_A 38869_A 38870_A 38851_A 38842_A 38912_A 38913_A 38916_A 38964_A 38993_A 38994_A 38995_A 38996_A 39000_A 39001_A 39029_A 39031_A 39034_A 38854_A 38859_A 38860_A 38914_A 38915_A 38969_A 39004_A 39005_A 39026_A 38853_A 38852_A 38845_A 38843_A 38917_A 38965_A 38966_A 38967_A 38968_A 39002_A 39003_A 39027_A 38867_A 38871_A 38872_A 38878_A 38990_A 38991_A 38992_A 38997_A 39032_A 39033_A 38877_A 38879_A 38880_A 38881_A 38998_A 38999_A 39028_A 39030_A 39035_A 39036_A Factors Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:Non-transgenic Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:caPI3K Tg (+/+) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | Genotype:dnPI3K Tg (+/-) Tissue:Ventricles | Sex:Male | 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HexCer 18:2;O2/20:0 HexCer(d18:2/22:0) HexCer 782.7 262.3 9.028966667 HexCer 18:2;O2/22:0 HexCer(d18:2/24:0) HexCer 810.7 262.3 10.0158 HexCer 18:2;O2/24:0 Hex2Cer(d16:1/16:0) Hex2Cer 834.6 236.3 5.116716667 Hex2Cer 16:1;O2/16:0 Hex2Cer(d16:1/24:1) Hex2Cer 944.7 236.3 8.0915 Hex2Cer 16:1;O2/24:1 Hex2Cer(d18:1/16:0) Hex2Cer 862.6 264.3 5.957133333 Hex2Cer 18:1;O2/16:0 Hex2Cer(d18:1/18:0) Hex2Cer 890.7 264.3 7.407833333 Hex2Cer 18:1;O2/18:0 Hex2Cer(d18:1/20:0) Hex2Cer 918.7 264.3 8.0062 Hex2Cer 18:1;O2/20:0 Hex2Cer(d18:1/22:0) Hex2Cer 946.7 264.3 9.166966667 Hex2Cer 18:1;O2/22:0 Hex2Cer(d18:1/24:0) Hex2Cer 974.8 264.3 10.03676667 Hex2Cer 18:1;O2/24:0 Hex2Cer(d18:1/24:1) Hex2Cer 972.7 264.3 9.202416667 Hex2Cer 18:1;O2/24:1 Hex2Cer(d18:2/16:0) Hex2Cer 860.6 262.3 5.281916667 Hex2Cer 18:2;O2/16:0 Hex2Cer(d18:2/18:0) Hex2Cer 888.7 262.3 6.141366667 Hex2Cer 18:2;O2/18:0 Hex2Cer(d18:2/24:1) Hex2Cer 970.7 262.3 8.263583333 Hex2Cer 18:2;O2/24:1 Hex3Cer(d18:1/16:0) Hex3Cer 1024.7 264.3 5.58505 Hex3Cer 18:1;O2/16:0 Hex3Cer(d18:1/18:0) Hex3Cer 1052.7 264.3 6.4747 Hex3Cer 18:1;O2/18:0 Hex3Cer(d18:1/20:0) Hex3Cer 1080.7 264.3 7.497233333 Hex3Cer 18:1;O2/20:0 Hex3Cer(d18:1/22:0) Hex3Cer 1108.8 264.3 8.625416667 Hex3Cer 18:1;O2/22:0 Hex3Cer(d18:1/24:0) Hex3Cer 1136.8 264.3 9.842266667 Hex3Cer 18:1;O2/24:0 Hex3Cer(d18:1/24:1) Hex3Cer 1134.8 264.3 8.65015 Hex3Cer 18:1;O2/24:1 GM3(d18:1/16:0) GM3 1153.7 264.3 4.7608 GM3 18:1;O2/16:0 GM3(d18:1/18:0) GM3 1181.8 264.3 5.36455 GM3 18:1;O2/18:0 GM3(d18:1/20:0) GM3 1209.8 264.3 6.22045 GM3 18:1;O2/20:0 GM3(d18:1/22:0) GM3 1237.8 264.3 7.15795 GM3 18:1;O2/22:0 GM3(d18:1/24:0) GM3 1265.8 264.3 8.214166667 GM3 18:1;O2/24:0 GM3(d18:1/24:1) GM3 1263.8 264.3 7.184366667 GM3 18:1;O2/24:1 GM3(d18:2/24:1) GM4 1261.8 262.3 6.447616667 GM3 18:2;O2/24:1 GM1(d18:1/16:0) GM1 760.1 366.2 4.549883333 GM1 18:1;O2/16:0 SHexCer(d18:1/16:0(OH)) Sulfatide 796.8 264.3 4.80345 - SHexCer(d18:1/16:0) Sulfatide 780.8 264.3 4.952983333 SHexCer 18:1;O2/16:0 SHexCer(d18:1/24:0(OH)) Sulfatide 908.8 264.3 8.350366667 - SHexCer(d18:1/24:0) Sulfatide 892.8 264.3 8.5507 SHexCer 18:1;O2/24:0 SHexCer(d18:1/24:1(OH)) Sulfatide 906.8 264.3 7.211633333 - SHexCer(d18:1/24:1) Sulfatide 890.8 264.3 7.51045 SHexCer 18:1;O2/24:1 SM(d17:1/14:0) SM 661.5 184.1 4.7261 SM 17:1;O2/14:0 SM(d18:0/14:0) SM 677.6 184.1 5.429383333 SM 18:0;O2/14:0 SM(d18:1/14:0)/SM(d16:1/16:0) SM 675.5 184.1 5.095016667 - SM(d18:2/14:0) SM 673.5 184.1 4.591116667 SM 18:2;O2/14:0 SM(d17:1/16:0) SM 689.6 184.1 5.480066667 SM 17:1;O2/16:0 SM(d18:0/16:0) SM 705.6 184.1 6.27135 SM 18:0;O2/16:0 SM(d18:1/16:0) SM 703.6 184.1 5.913166667 SM 18:1;O2/16:0 SM(d18:2/16:0) SM 701.6 184.1 5.260683333 SM 18:2;O2/16:0 SM(34:3) SM 699.5 184.1 4.779416667 SM 34:3;O2 SM(d16:1/19:0) SM 717.6 184.1 6.150283333 SM 16:1;O2/19:0 SM(d18:1/17:0)/SM(d17:1/18:0) SM 717.6 184.1 6.39045 - SM(d18:2/17:0) SM 715.6 184.1 5.607916667 SM 18:2;O2/17:0 SM(35:2) (b) SM 715.6 184.1 5.872783333 SM 35:2;O2 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