#METABOLOMICS WORKBENCH segundocasaro_20231130_063936 DATATRACK_ID:4485 STUDY_ID:ST002994 ANALYSIS_ID:AN004918 VERSION 1 CREATED_ON 01-26-2024 #PROJECT PR:PROJECT_TITLE Integrating uterine microbiome and metabolome to advance the understanding of PR:PROJECT_TITLE the uterine environment in dairy cows with metritis PR:PROJECT_SUMMARY Background: Metritis is a prevalent uterine disease that affects the welfare, PR:PROJECT_SUMMARY fertility, and survival of dairy cows. The uterine microbiome from cows that PR:PROJECT_SUMMARY develop metritis and those that remain healthy do not differ from calving until PR:PROJECT_SUMMARY 2 days after calving, after which there is a dysbiosis of the uterine microbiome PR:PROJECT_SUMMARY characterized by a shift towards opportunistic pathogens such as Fusobacteriota PR:PROJECT_SUMMARY and Bacteroidota. Whether these opportunistic pathogens proliferate and overtake PR:PROJECT_SUMMARY the uterine commensals could be determined by the type of substrates present in PR:PROJECT_SUMMARY the uterus. The objective of this study was to integrate uterine metabolome and PR:PROJECT_SUMMARY microbiome data to advance the understanding of metritis development in dairy PR:PROJECT_SUMMARY cows. Holstein cows (n = 104) had uterine fluid collected at calving and at the PR:PROJECT_SUMMARY day of metritis diagnosis. Cows with metritis (n = 52) were paired with cows PR:PROJECT_SUMMARY without metritis (n = 52) based on days after calving. First, the uterine PR:PROJECT_SUMMARY metabolome and microbiome were evaluated individually, and then integrated using PR:PROJECT_SUMMARY network analyses. Results: The uterine metabolome differed both at calving and PR:PROJECT_SUMMARY on the day of metritis diagnosis between cows with and without metritis. The PR:PROJECT_SUMMARY uterine microbiome did not differ at calving but differed on the day of metritis PR:PROJECT_SUMMARY diagnosis between cows with and without metritis. Omics integration was PR:PROJECT_SUMMARY performed between 153 significant metabolites and 6 significant bacteria genera PR:PROJECT_SUMMARY on the day of metritis diagnosis. A total of 49 metabolites were correlated with PR:PROJECT_SUMMARY 3 bacteria genera (i.e. Fusobacteria, Porphyromonas and Bacteroides) on the day PR:PROJECT_SUMMARY of metritis diagnosis. The main metabolites have been associated with PR:PROJECT_SUMMARY attenuation of biofilm formation by commensal bacteria, pathogenic bacterial PR:PROJECT_SUMMARY overgrowth, defense mechanisms against the immune system, tissue damage and PR:PROJECT_SUMMARY inflammation, and immune dysregulation. Conclusions: The data integration PR:PROJECT_SUMMARY presented herein helps advance the understanding of metritis development in PR:PROJECT_SUMMARY dairy cows. The identified metabolites may be promising targets for future PR:PROJECT_SUMMARY interventions aiming to reduce pathogenic bacterial growth in the uterus, and PR:PROJECT_SUMMARY therefore, reducing the incidence of metritis. PR:INSTITUTE University of Florida PR:DEPARTMENT Large Animal Clinical Sciences PR:LAST_NAME Segundo PR:FIRST_NAME Casaro PR:ADDRESS 117 Deriso Hall, 2015 SW 16th Ave., Gainesville, FL 32610 PR:EMAIL segundocasaro@ufl.edu PR:PHONE 3522844016 PR:DOI http://dx.doi.org/10.21228/M8S425 #STUDY ST:STUDY_TITLE Integrating uterine microbiome and metabolome to advance the understanding of ST:STUDY_TITLE the uterine environment in dairy cows with metritis ST:STUDY_SUMMARY Background: Metritis is a prevalent uterine disease that affects the welfare, ST:STUDY_SUMMARY fertility, and survival of dairy cows. The uterine microbiome from cows that ST:STUDY_SUMMARY develop metritis and those that remain healthy do not differ from calving until ST:STUDY_SUMMARY 2 days after calving, after which there is a dysbiosis of the uterine microbiome ST:STUDY_SUMMARY characterized by a shift towards opportunistic pathogens such as Fusobacteriota ST:STUDY_SUMMARY and Bacteroidota. Whether these opportunistic pathogens proliferate and overtake ST:STUDY_SUMMARY the uterine commensals could be determined by the type of substrates present in ST:STUDY_SUMMARY the uterus. The objective of this study was to integrate uterine metabolome and ST:STUDY_SUMMARY microbiome data to advance the understanding of metritis development in dairy ST:STUDY_SUMMARY cows. Holstein cows (n = 104) had uterine fluid collected at calving and at the ST:STUDY_SUMMARY day of metritis diagnosis. Cows with metritis (n = 52) were paired with cows ST:STUDY_SUMMARY without metritis (n = 52) based on days after calving. First, the uterine ST:STUDY_SUMMARY metabolome and microbiome were evaluated individually, and then integrated using ST:STUDY_SUMMARY network analyses. Results: The uterine metabolome differed both at calving and ST:STUDY_SUMMARY on the day of metritis diagnosis between cows with and without metritis. The ST:STUDY_SUMMARY uterine microbiome did not differ at calving but differed on the day of metritis ST:STUDY_SUMMARY diagnosis between cows with and without metritis. Omics integration was ST:STUDY_SUMMARY performed between 153 significant metabolites and 6 significant bacteria genera ST:STUDY_SUMMARY on the day of metritis diagnosis. A total of 49 metabolites were correlated with ST:STUDY_SUMMARY 3 bacteria genera (i.e. Fusobacteria, Porphyromonas and Bacteroides) on the day ST:STUDY_SUMMARY of metritis diagnosis. The main metabolites have been associated with ST:STUDY_SUMMARY attenuation of biofilm formation by commensal bacteria, pathogenic bacterial ST:STUDY_SUMMARY overgrowth, defense mechanisms against the immune system, tissue damage and ST:STUDY_SUMMARY inflammation, and immune dysregulation. Conclusions: The data integration ST:STUDY_SUMMARY presented herein helps advance the understanding of metritis development in ST:STUDY_SUMMARY dairy cows. The identified metabolites may be promising targets for future ST:STUDY_SUMMARY interventions aiming to reduce pathogenic bacterial growth in the uterus, and ST:STUDY_SUMMARY therefore, reducing the incidence of metritis. ST:INSTITUTE University of Florida ST:LAST_NAME Casaro ST:FIRST_NAME Segundo ST:ADDRESS 117 Deriso Hall, 2015 SW 16th Ave., Gainesville, FL 32610 ST:EMAIL segundocasaro@ufl.edu ST:PHONE 3522844016 ST:SUBMIT_DATE 2023-11-30 #SUBJECT SU:SUBJECT_TYPE Mammal SU:SUBJECT_SPECIES Bos taurus SU:TAXONOMY_ID 9913 SU:GENDER Female SU:ANIMAL_HOUSING Free-stalls SU:ANIMAL_FEED TMR #SUBJECT_SAMPLE_FACTORS: SUBJECT(optional)[tab]SAMPLE[tab]FACTORS(NAME:VALUE pairs separated by |)[tab]Additional sample data SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10001 10001_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10038 10038_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 9268 9268_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 9280 9280_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 9509 9509_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 9536 9536_Calving_Con Group:Con | Time:Calving | 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SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10231 10231_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10239 10239_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10249 10249_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10251 10251_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10253 10253_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10256 10256_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10257 10257_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10258 10258_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10259 10259_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10260 10260_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10263 10263_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10267 10267_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10278 10278_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10293 10293_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10294 10294_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10298 10298_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10304 10304_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10308 10308_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 10318 10318_Diagnosis_Met Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim #COLLECTION CO:COLLECTION_SUMMARY All cows had uterine fluid collected at calving (first 24h after calving), and CO:COLLECTION_SUMMARY at diagnosis (day of metritis diagnosis). Briefly, cows’ cervix was stabilized CO:COLLECTION_SUMMARY by rectal palpation, the vulva was rinsed with alcohol 70% and dried with paper CO:COLLECTION_SUMMARY towels. Subsequently, a single-use plastic round-tip pipette (UterFlush CO:COLLECTION_SUMMARY pipettes, Van Beek) was introduced into the vagina at a 45° angle and CO:COLLECTION_SUMMARY manipulated through the cervix. A total of 50 mL of sterile saline solution CO:COLLECTION_SUMMARY (0.9% sodium chloride irrigation, Baxter) was infused into the uterine lumen CO:COLLECTION_SUMMARY using a 60-mL syringe (Covidien) attached to the end of the pipette. Uterine CO:COLLECTION_SUMMARY contents were homogenized, retrieved into the same 60-mL syringe, and CO:COLLECTION_SUMMARY transferred to a sterile 15-mL conical tube (VWR). After collection, tubes were CO:COLLECTION_SUMMARY placed on ice and transported to the laboratory within 2 hours. Once in the CO:COLLECTION_SUMMARY laboratory, uterine fluid samples were aliquoted into 2-mL microcentrifuge tubes CO:COLLECTION_SUMMARY (Eppendorf) and stored at -80 oC until essayed. One frozen uterine fluid aliquot CO:COLLECTION_SUMMARY was submitted to the University of California’s West Coast Metabolomics Center CO:COLLECTION_SUMMARY in Davis, CA for metabolome analysis. CO:SAMPLE_TYPE Uterine fluid #TREATMENT TR:TREATMENT_SUMMARY This was a case-control study, hence, there were not treatments applied. Cows TR:TREATMENT_SUMMARY were self-assigned to the groups. Cows that developed metritis were paired with TR:TREATMENT_SUMMARY healthy cows by days in milk. #SAMPLEPREP SP:SAMPLEPREP_SUMMARY Uterine fluid samples were aliquoted into 2-mL microcentrifuge tubes (Eppendorf) SP:SAMPLEPREP_SUMMARY and stored at -80 oC until essayed. #CHROMATOGRAPHY CH:INSTRUMENT_NAME Leco Pegasus IV GC CH:COLUMN_NAME Restek Rtx-5Sil MS (30m x 0.25mm, 0.25um) CH:COLUMN_TEMPERATURE 50-330 CH:FLOW_GRADIENT . CH:FLOW_RATE 1 mL min-1 CH:SOLVENT_A . CH:SOLVENT_B . CH:CHROMATOGRAPHY_TYPE GC #ANALYSIS AN:ANALYSIS_TYPE MS #MS MS:INSTRUMENT_NAME Leco Pegasus IV TOF MS:INSTRUMENT_TYPE GC-TOF MS:MS_TYPE EI MS:MS_COMMENTS Data are acquired using the following chromatographic parameters, with more MS:MS_COMMENTS details to be found in Fiehn O. et al. Plant J. 53 (2008) 691–704. Column: MS:MS_COMMENTS Restek corporation Rtx-5Sil MS (30 m length x 0.25 mm internal diameter with MS:MS_COMMENTS 0.25 μm film made of 95% dimethyl/5%diphenylpolysiloxane) Mobile phase: Helium MS:MS_COMMENTS Column temperature: 50-330°C Flow- rate: 1 mL min-1 Injection volume: 0.5 μL MS:MS_COMMENTS Injection: 25 splitless time into a multi-baffled glass liner Injection MS:MS_COMMENTS temperature: 50°C ramped to 250°C by 12°C s-1 Oven temperature program: 50°C MS:MS_COMMENTS for 1 min, then ramped at 20°C min-1 to 330°C, held constant for 5 min. The MS:MS_COMMENTS analytical GC column is protected by a 10 m long empty guard column which is cut MS:MS_COMMENTS by 20 cm intervals whenever the reference mixture QC samples indicate problems MS:MS_COMMENTS caused by column contaminations. We have validated that at this sequence of MS:MS_COMMENTS column cuts, no detrimental effects are detected with respect to peak shapes, MS:MS_COMMENTS absolute or relative metabolite retention times or reproducibility of MS:MS_COMMENTS quantifications. This chromatography method yields excellent retention and MS:MS_COMMENTS separation of primary metabolite classes (amino acids, hydroxyl acids, MS:MS_COMMENTS carbohydrates, sugar acids, sterols, aromatics, nucleosides, amines and MS:MS_COMMENTS miscellaneous compounds) with narrow peak widths of 2–3 s and very good MS:MS_COMMENTS within-series retention time reproducibility of better than 0.2 s absolute MS:MS_COMMENTS deviation of retention times. We use automatic liner exchanges after each set of MS:MS_COMMENTS 10 injections which we could show to reduce sample carryover for highly MS:MS_COMMENTS lipophilic compounds such as free fatty acids. Mass spectrometry parameters are MS:MS_COMMENTS used as follows: a Leco Pegasus IV mass spectrometer is used with unit mass MS:MS_COMMENTS resolution at 17 spectra s-1 from 80-500 Da at - 70 eV ionization energy and MS:MS_COMMENTS 1800 V detector voltage with a 230°C transfer line and a 250°C ion source. MS:ION_MODE POSITIVE #MS_METABOLITE_DATA MS_METABOLITE_DATA:UNITS peak heights MS_METABOLITE_DATA_START Samples 10001_Calving_Con 10038_Calving_Con 9268_Calving_Con 9280_Calving_Con 9509_Calving_Con 9536_Calving_Con 9778_Calving_Con 9794_Calving_Con 9802_Calving_Con 9804_Calving_Con 9823_Calving_Con 9872_Calving_Con 9875_Calving_Con 9876_Calving_Con 9904_Calving_Con 9907_Calving_Con 9917_Calving_Con 9918_Calving_Con 9924_Calving_Con 9925_Calving_Con 9927_Calving_Con 9942_Calving_Con 9944_Calving_Con 9945_Calving_Con 9950_Calving_Con 9954_Calving_Con 9956_Calving_Con 9957_Calving_Con 9966_Calving_Con 9971_Calving_Con 9979_Calving_Con 9985_Calving_Con 9987_Calving_Con 9992_Calving_Con 10165_Calving_Con 10171_Calving_Con 10189_Calving_Con 10194_Calving_Con 10199_Calving_Con 10212_Calving_Con 10229_Calving_Con 10245_Calving_Con 10246_Calving_Con 10254_Calving_Con 10261_Calving_Con 10262_Calving_Con 10264_Calving_Con 10268_Calving_Con 10274_Calving_Con 10290_Calving_Con 10303_Calving_Con 10311_Calving_Con 10001_Diagnosis_Con 10038_Diagnosis_Con 9268_Diagnosis_Con 9280_Diagnosis_Con 9509_Diagnosis_Con 9536_Diagnosis_Con 9778_Diagnosis_Con 9794_Diagnosis_Con 9802_Diagnosis_Con 9804_Diagnosis_Con 9823_Diagnosis_Con 9872_Diagnosis_Con 9875_Diagnosis_Con 9876_Diagnosis_Con 9904_Diagnosis_Con 9907_Diagnosis_Con 9917_Diagnosis_Con 9918_Diagnosis_Con 9924_Diagnosis_Con 9925_Diagnosis_Con 9927_Diagnosis_Con 9942_Diagnosis_Con 9944_Diagnosis_Con 9945_Diagnosis_Con 9950_Diagnosis_Con 9954_Diagnosis_Con 9956_Diagnosis_Con 9957_Diagnosis_Con 9966_Diagnosis_Con 9971_Diagnosis_Con 9979_Diagnosis_Con 9985_Diagnosis_Con 9987_Diagnosis_Con 9992_Diagnosis_Con 10165_Diagnosis_Con 10171_Diagnosis_Con 10189_Diagnosis_Con 10194_Diagnosis_Con 10199_Diagnosis_Con 10212_Diagnosis_Con 10229_Diagnosis_Con 10245_Diagnosis_Con 10246_Diagnosis_Con 10254_Diagnosis_Con 10261_Diagnosis_Con 10262_Diagnosis_Con 10264_Diagnosis_Con 10268_Diagnosis_Con 10274_Diagnosis_Con 10290_Diagnosis_Con 10303_Diagnosis_Con 10311_Diagnosis_Con 10004_Calving_Met 8790_Calving_Met 9193_Calving_Met 9206_Calving_Met 9221_Calving_Met 9232_Calving_Met 9292_Calving_Met 9481_Calving_Met 9490_Calving_Met 9505_Calving_Met 9669_Calving_Met 9796_Calving_Met 9810_Calving_Met 9832_Calving_Met 9848_Calving_Met 9908_Calving_Met 9910_Calving_Met 9977_Calving_Met 9980_Calving_Met 10156_Calving_Met 10158_Calving_Met 10175_Calving_Met 10193_Calving_Met 10198_Calving_Met 10206_Calving_Met 10207_Calving_Met 10208_Calving_Met 10213_Calving_Met 10215_Calving_Met 10219_Calving_Met 10222_Calving_Met 10223_Calving_Met 10230_Calving_Met 10231_Calving_Met 10239_Calving_Met 10249_Calving_Met 10251_Calving_Met 10253_Calving_Met 10256_Calving_Met 10257_Calving_Met 10258_Calving_Met 10259_Calving_Met 10260_Calving_Met 10263_Calving_Met 10267_Calving_Met 10278_Calving_Met 10293_Calving_Met 10294_Calving_Met 10298_Calving_Met 10304_Calving_Met 10308_Calving_Met 10318_Calving_Met 10004_Diagnosis_Met 8790_Diagnosis_Met 9193_Diagnosis_Met 9206_Diagnosis_Met 9221_Diagnosis_Met 9232_Diagnosis_Met 9292_Diagnosis_Met 9481_Diagnosis_Met 9490_Diagnosis_Met 9505_Diagnosis_Met 9669_Diagnosis_Met 9796_Diagnosis_Met 9810_Diagnosis_Met 9832_Diagnosis_Met 9848_Diagnosis_Met 9908_Diagnosis_Met 9910_Diagnosis_Met 9977_Diagnosis_Met 9980_Diagnosis_Met 10156_Diagnosis_Met 10158_Diagnosis_Met 10175_Diagnosis_Met 10193_Diagnosis_Met 10198_Diagnosis_Met 10206_Diagnosis_Met 10207_Diagnosis_Met 10208_Diagnosis_Met 10213_Diagnosis_Met 10215_Diagnosis_Met 10219_Diagnosis_Met 10222_Diagnosis_Met 10223_Diagnosis_Met 10230_Diagnosis_Met 10231_Diagnosis_Met 10239_Diagnosis_Met 10249_Diagnosis_Met 10251_Diagnosis_Met 10253_Diagnosis_Met 10256_Diagnosis_Met 10257_Diagnosis_Met 10258_Diagnosis_Met 10259_Diagnosis_Met 10260_Diagnosis_Met 10263_Diagnosis_Met 10267_Diagnosis_Met 10278_Diagnosis_Met 10293_Diagnosis_Met 10294_Diagnosis_Met 10298_Diagnosis_Met 10304_Diagnosis_Met 10308_Diagnosis_Met 10318_Diagnosis_Met Factors Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Mult Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Calving | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Con | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Mult Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Calving | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Mult Group:Met | 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Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim Group:Met | Time:Diagnosis | Parity:Prim 1_5-anhydroglucitol 11657.0000 13044.0000 13394.0000 9558.0000 12084.0000 35300.0000 14589.0000 13936.0000 25756.0000 31204.0000 10987.0000 28423.0000 13005.0000 32622.0000 39516.0000 33264.0000 19442.0000 23764.0000 15612.0000 20100.0000 13954.0000 16078.0000 17696.0000 46169.0000 13831.0000 4053.0000 14669.0000 26502.0000 23087.0000 17575.0000 6494.0000 17513.0000 15560.0000 17159.0000 12151.0000 18786.0000 16875.0000 14460.0000 21957.0000 41326.0000 38218.0000 43886.0000 41338.0000 53198.0000 11243.0000 14101.0000 20619.0000 13962.0000 17780.0000 16144.0000 53266.0000 24353.0000 17954.0000 15866.0000 12870.0000 4883.0000 6934.0000 5807.0000 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hydroxycarbamate 16639161 . 325318 278 hypoxanthine 790 C00262 619128 265 ile-ile . 677904 158 indole-3-acetate 802 C00954 684929 202 indole-3-lactate . 764079 202 indole-3-propionic acid 3744 . 732249 202 indoxyl sulfate 10258 . 577333 277 inosine 6021 C00294 897434 230 inositol-4-monophosphate 440043 C03546 845976 315 isocitric acid 5318532 C00451 617338 245 isoheptadecanoic acid 164860 . 737927 117 isoleucine 6306 C00407 359251 158 isolinoleic acid 5312483 . 794629 156 isopentadecanoic acid 151014 . 663518 117 isoribose 10975657 . 558730 217 isothreonic acid 151152 C00639 489385 292 itaconic acid 811 C00490 386511 147 kynurenine 25245862 C01718 769709 218 lactamide 94220 . 265698 232 lactic acid 612 C01432 217657 191 lactitol 157355 C13542 959541 361 lactobionic acid 7314 C04247 972139 204 lactose 6134 C01970 936998 204 lanosterol 246983 C01724 1129573 393 lauric acid 3893 C02679 547906 117 leucine 6106 C00123 345845 158 lignoceric acid 11197 C08320 978597 132 linoleic acid 5280450 C01595 777414 150 lithocholic acid 9903 C03990 1104161 215 lysine 5962 C00047 663483 317 lyxitol 439255 C00532 573587 217 lyxose 439240 C00476 541086 217 maleimide 10935 C07272 245118 154 malic acid 525 C00711 463180 233 malonic acid 867 C00383 305372 233 maltose 439186 C00208 946601 204 maltotriose 439586 C01835 1176044 361 mannose 18950 C00159 645856 205 mannose-6-phosphate 65127 C00275 822643 387 melibiose 440658 C05402 988497 361 methanolphosphate 13130 . 289520 241 methionine 6137 C00073 483560 176 methionine sulfoxide 158980 C02989 637588 128 methylmaleic acid 643798 C02226 418804 259 Mevalonic acid . 498785 247 myo-inositol 892 C00137 730022 305 myristic acid 11005 C06424 634414 285 N-acetylaspartic acid 65065 C01042 548028 158 N-acetyl-D-galactosamine 440552 C05021 720730 319 N-acetylglycine 10972 . 356109 174 N-acetylmannosamine 439281 C00645 735323 319 N-acetylornithine 439232 C00437 682693 174 N-carbamoylaspartate 93072 C00438 611345 257 n-epsilon-trimethyllysine 440121 . 512366 118 nicotinamide 936 C00153 471602 179 nicotinic acid 938 C00253 366992 180 nonadecanoic acid 12591 C16535 822782 117 norvaline 65098 C01826 326715 144 O-acetylserine 99478 C00979 414914 174 octadecanol 8221 . 755409 327 octadecylglycerol 3681 C13858 928878 205 oleamide 5283387 C19670 849710 144 oleic acid 445639 C00712 781527 339 O-phosphoserine 57689797 C01005 624355 356 ornithine 6262 C00077 527113 142 orotic acid 967 C00295 586317 254 oxalic acid 971 C00209 260513 190 oxoproline 7405 C01879 485935 156 palmitic acid 985 C00249 713809 313 palmitoleic acid 445638 C08362 706508 311 pantothenic acid 6613 C12276 690887 291 parabanic acid 67126 C00802 464991 100 pentadecanoic acid 13849 C16537 674647 117 pentitol 827 D00061 563801 307 phenaceturic acid 68144 C05598 654351 91 phenylacetic acid 999 C07086 368081 164 phenylalanine 6140 C00079 537804 192 phenylethylamine 1001 C05332 510327 174 phosphate 1004 C00009 348274 314 phosphoenolpyruvate 58114173 C00074 518184 211 phosphoethanolamine 1015 C00346 604335 299 p-hydroxylphenyllactic acid 9378 C03672 654036 308 phytanic acid 10380830 . 770604 159 pimelic acid 385 C02656 523205 155 pipecolinic acid 6931662 . 404121 156 piperidone 12665 . 275603 156 proline 145742 C00148 364716 142 pseudo uridine 15047 C02067 813899 217 p-tolyl glucuronide 154035 . 847531 180 putrescine 1045 C00138 588119 174 pyrophosphate 1023 C00013 327517 110 pyrrole-2-carboxylic acid 12473 C05942 394886 240 pyruvic acid 1060 C00022 211668 174 quinolinic acid 1066 C03722 581638 296 ribitol 827 C00474 575497 217 ribonic acid 5460677 C01685 597646 292 ribose 5779 C00121 553135 217 ribose-5-phosphate 439167 C00117 731837 315 ribulose-5-phosphate 439184 C00199 735908 357 saccharic acid 33037 C00818 699211 333 sarcosine 7311726 C00213 266344 116 serine 5951 C00065 395020 204 serotonin 5202 C00780 863824 174 shikimic acid 8742 C00493 611100 204 sophorose 441432 C08250 962064 307 sorbitol 5780 C00794 667922 217 spermidine 1102 C00315 792924 144 squalene 638072 C00751 976237 95 stearic acid 5281 C01530 787622 117 succinate semialdehyde 1112 C00232 297024 113 succinic acid 1110 C00042 370608 247 sucrose 5988 C00089 915139 271 tagatose 439312 C00795 631835 307 taurine 1123 C00245 556690 326 threitol 169019 C16884 467595 217 threonic acid 5460407 C01620 497572 292 threonine 6288 C00188 409568 218 thymidine 5789 C00214 349402 170 thymine 1135 C00178 420133 255 tocopherol alpha- 638015 C00376 1066526 237 trans-4-hydroxyproline 5810 C01157 484934 140 trehalose 7427 C01083 948197 191 tryptophan 6305 C00078 774603 130 tryptophol . 657957 202 tyrosine 6057 C00082 671252 218 tyrosol 10393 C06044 510842 179 UDP GlcNAc 445675 C00043 627437 226 undecanoic acid 8180 C17715 500757 117 uracil 1174 C00106 385735 241 urea 1176 C00086 328888 189 uric acid 1175 C00366 731038 441 uridine 6029 C00299 861508 217 urocanic acid 736715 C00785 699866 267 valine 6287 C00183 313502 144 xanthine 1188 C00385 701688 353 xanthosine 64959 C01762 926133 325 xylitol 6912 C00379 567437 217 xylose 135191 C00181 544100 103 xylulose 439205 C00312 553450 173 METABOLITES_END #END