#METABOLOMICS WORKBENCH ian_lacroix_cuanschutz_20240117_093449 DATATRACK_ID:4587 STUDY_ID:ST003046 ANALYSIS_ID:AN004997 PROJECT_ID:PR001896 VERSION 1 CREATED_ON 01-06-2025 #PROJECT PR:PROJECT_TITLE Multi-Omics Plasma Signatures of Severe Injury with Influence of REBOA PR:PROJECT_TITLE Intervention in a Swine Model. PR:PROJECT_TYPE Origninal Research PR:PROJECT_SUMMARY Swine experienced controlled severe injury involving combinations of trauma, PR:PROJECT_SUMMARY hemorrhagic shock, and disseminated complex blast injury (DCBI). After a period PR:PROJECT_SUMMARY of hemorrhagic shock, resuscitation was performed using REBOA and shed blood PR:PROJECT_SUMMARY transfusion. Blood samples were collected from sham and experiment swine. Blood PR:PROJECT_SUMMARY samples for experiment swine were collected at baseline and periodically through PR:PROJECT_SUMMARY the monitored time course. The plasma fraction were then subjected to mass PR:PROJECT_SUMMARY spectrometry based metabolomics. PR:INSTITUTE University of Colorado Denver â Anschutz Medical Campus PR:DEPARTMENT Department of Biochemistry and Molecular Genetics PR:LABORATORY The D'Alessandro Lab PR:LAST_NAME LaCroix PR:FIRST_NAME Ian PR:ADDRESS 12801 E 17th Ave, Aurora, Colorado, 80045, USA PR:EMAIL ian.lacroix@cuanschutz.edu PR:PHONE (303) 724-0096 PR:PUBLICATIONS DOI: 10.1097/SLA.0000000000005944 PR:DOI http://dx.doi.org/10.21228/M8N72Z #STUDY ST:STUDY_TITLE Multi-Omics Plasma Signatures of Severe Injury with Influence of REBOA ST:STUDY_TITLE Intervention in a Swine Model. ST:STUDY_TYPE Original Research ST:STUDY_SUMMARY Swine experienced controlled severe injury involving combinations of trauma, ST:STUDY_SUMMARY hemorrhagic shock, and disseminated complex blast injury (DCBI). After a period ST:STUDY_SUMMARY of hemorrhagic shock, resuscitation was performed using Resuscitative ST:STUDY_SUMMARY Endovascular Balloon Occlusion of the Aorta (REBOA) and shed blood transfusion. ST:STUDY_SUMMARY Blood samples were collected from sham and experiment swine. Blood samples for ST:STUDY_SUMMARY experiment swine were collected at baseline and periodically through the ST:STUDY_SUMMARY monitored time course. The plasma fraction were then subjected to mass ST:STUDY_SUMMARY spectrometry based metabolomics. Results indicated intervention using REBOA ST:STUDY_SUMMARY following polytrauma in our swine model induced distinct multi-omics alterations ST:STUDY_SUMMARY as a function of placement location. Namely, aortic balloon placement in Zone-1 ST:STUDY_SUMMARY worsened ischemic damage and mitochondrial dysfunction, patterns that continued ST:STUDY_SUMMARY through the monitored time course. ST:INSTITUTE University of Colorado Anschutz Medical Campus ST:LABORATORY The D'Alessandro Lab ST:LAST_NAME LaCroix ST:FIRST_NAME Ian ST:ADDRESS RC1-S L18-9403G E 17th Ave. Aurora, CO 80045 ST:EMAIL ian.lacroix@cuanschutz.edu ST:PHONE (303) 724-0096 ST:SUBMIT_DATE 2024-01-17 #SUBJECT SU:SUBJECT_TYPE Mammal SU:SUBJECT_SPECIES Sus scrofa SU:TAXONOMY_ID 9823 SU:GENDER Male SU:SPECIES_GROUP Mammals #SUBJECT_SAMPLE_FACTORS: SUBJECT(optional)[tab]SAMPLE[tab]FACTORS(NAME:VALUE pairs separated by |)[tab]Additional sample data SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 20 108 Pig_Model:DCBI | Time_from_End_of_Shock_min:0 Vendor=Oak Hills Genetics; Breed=White Yorkshire x Landrace; RAW_FILE_NAME=ILC03-108 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 24 131 Pig_Model:DCBI | Time_from_End_of_Shock_min:0 Vendor=Oak Hills Genetics; Breed=White Yorkshire x Landrace; RAW_FILE_NAME=ILC03-131 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 26 145 Pig_Model:DCBI | Time_from_End_of_Shock_min:0 Vendor=Oak Hills Genetics; Breed=White Yorkshire x Landrace; RAW_FILE_NAME=ILC03-145 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS 28 152 Pig_Model:DCBI | Time_from_End_of_Shock_min:0 Vendor=Oak Hills Genetics; 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In brief, on the day of surgery, CO:COLLECTION_SUMMARY swine anesthesia was induced via intramuscular injection of ketamine (20.0 CO:COLLECTION_SUMMARY mg/kg), xylazine (2.0 mg/kg), and acepromazine (0.2 mg/kg) followed by CO:COLLECTION_SUMMARY intubation under direct laryngoscopy. Continuous infusion anesthesia was CO:COLLECTION_SUMMARY maintained through a superficial ear vein using propofol (3 mg/kg/h) and CO:COLLECTION_SUMMARY fentanyl (3 mcg/kg/h). Lactated Ringerâs solution was administered at a rate CO:COLLECTION_SUMMARY of 10 mL/kg/h to overcome insensible losses. Mahurkar catheters (12 Fr) were CO:COLLECTION_SUMMARY placed in the femoral arteries and veins for vascular access. CO:COLLECTION_PROTOCOL_ID Animal Care and Use Committee approved this animal study under protocol #1050 CO:SAMPLE_TYPE Blood (plasma) CO:STORAGE_CONDITIONS -80â #TREATMENT TR:TREATMENT_SUMMARY the DCBI model included blast traumatic brain injury (bTBI), tissue injury TR:TREATMENT_SUMMARY through bilateral open femur fractures, followed by severe fixed pressure TR:TREATMENT_SUMMARY targeted hemorrhagic shock (HS). Zone-I aortic occlusion (AO) was performed TR:TREATMENT_SUMMARY using the ER-REBOA Catheter (Prytime Medical Devices, Inc., Boerne, TX). The TR:TREATMENT_SUMMARY catheter was inserted through a 7 Fr sheath placed in the common femoral artery, TR:TREATMENT_SUMMARY was advanced to 50 cm, and inflated using 6 mL of normal saline for Zone-I AO TR:TREATMENT_SUMMARY and placed at 26 cm with 5 ml of saline for Zone-III, and both were maintained TR:TREATMENT_SUMMARY for the final 30 minutes of the HS phase. #SAMPLEPREP SP:SAMPLEPREP_SUMMARY Plasma samples were thawed on ice then 20 μl was aliquoted into individual SP:SAMPLEPREP_SUMMARY 1.5mL microcentrifuge tubes. The plasma was diluted to 480 μl with SP:SAMPLEPREP_SUMMARY methanol:acetonitrile:water (5:3:2, v/v/v). The metabolite containing SP:SAMPLEPREP_SUMMARY supernatant was transferred to individual auto sampler vials on ice. SP:SAMPLEPREP_PROTOCOL_COMMENTS DOI https://doi.org/10.1007/978-1-4939-9236-2_2 SP:PROCESSING_STORAGE_CONDITIONS -80â SP:EXTRACT_STORAGE -80â #CHROMATOGRAPHY CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY The LC-MS solvents A and B, as well as the Flow gradient details are proprietary CH:CHROMATOGRAPHY_SUMMARY and will be made available upon request (angelo.dalesandro@cuanschutz.edu) CH:INSTRUMENT_NAME Thermo Vanquish CH:COLUMN_NAME Phenomenex Kinetex C18 (150 x 2.1mm,1.7um) CH:COLUMN_TEMPERATURE 45 CH:FLOW_GRADIENT - CH:FLOW_RATE 0.3mL/min CH:SOLVENT_A - CH:SOLVENT_B - CH:CHROMATOGRAPHY_TYPE Reversed phase #ANALYSIS AN:ANALYSIS_TYPE MS #MS MS:INSTRUMENT_NAME Thermo Q Exactive Orbitrap MS:INSTRUMENT_TYPE Orbitrap MS:MS_TYPE ESI MS:MS_COMMENTS Scanning in Full MS mode (2 μscans) from 90 to 900 m/z at 70,000 resolution, MS:MS_COMMENTS with 4 kV spray voltage, 45 sheath gas, 15 auxiliary gas(1). Following data MS:MS_COMMENTS acquisition, .raw files were converted to .mzXML using RawConverter then MS:MS_COMMENTS metabolites assigned and peaks integrated using ElMaven (Elucidata) in MS:MS_COMMENTS conjunction with an in-house standard library. MS:ION_MODE POSITIVE #MS_METABOLITE_DATA MS_METABOLITE_DATA:UNITS area under curve MS_METABOLITE_DATA_START Samples 108 131 145 152 78 94 107 128 130 144 151 77 86 93 111 134 148 155 81 90 97 112 135 149 156 82 91 98 113 136 150 157 83 92 99 109 132 146 153 79 88 95 110 133 147 154 80 89 96 69 70 71 16 2 9 1 15 8 12 19 5 13 20 6 14 21 7 10 17 3 11 18 4 138 159 163 187 201 121 137 158 162 186 200 125 141 166 190 204 126 142 167 191 205 127 143 168 192 206 123 139 160 164 188 202 124 140 161 165 189 203 170 180 194 216 303 324 328 335 169 179 214 215 302 323 327 334 173 183 197 219 306 331 174 184 198 220 307 332 175 185 199 221 308 333 171 181 195 217 304 325 329 336 172 182 196 218 305 330 337 23 237 244 32 46 22 236 243 31 45 240 247 26 35 49 241 248 27 36 50 242 249 28 37 51 238 24 245 33 47 239 246 25 34 48 30 39 53 60 63 29 38 52 59 62 42 56 66 43 57 67 44 58 68 40 54 61 64 41 55 65 257 275 276 230 251 262 269 229 250 261 268 233 254 265 272 234 255 266 273 235 256 267 274 231 252 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