#METABOLOMICS WORKBENCH baileyjsanchez_20241220_230058 DATATRACK_ID:5487 STUDY_ID:ST003649 ANALYSIS_ID:AN005995 PROJECT_ID:PR002259 VERSION 1 CREATED_ON 01-03-2025 #PROJECT PR:PROJECT_TITLE Human adenovirus serotype 5 infection dysregulates cysteine, purine, and PR:PROJECT_TITLE unsaturated fatty acid metabolism in fibroblasts PR:PROJECT_SUMMARY Over 100 types of adenoviruses exist across 7 species, with about 50 known to PR:PROJECT_SUMMARY infect humans. Human adenoviruses overtake the DNA replication machinery of the PR:PROJECT_SUMMARY infected host, rewiring mitotic events. Infection leads to the elevations in PR:PROJECT_SUMMARY glucose and glutamine consumption rates, while also increasing lactate PR:PROJECT_SUMMARY production rate. Fibroblast lineages are normally quiescent cells that display a PR:PROJECT_SUMMARY repertoire of responses to certain agonists. Data on the shifts in fibroblast PR:PROJECT_SUMMARY metabolism in response to human adenoviral infection are lacking. Specifically, PR:PROJECT_SUMMARY knowledge pertaining to metabolic shifts aside from those involved in glycolytic PR:PROJECT_SUMMARY metabolism after human adenoviral infection remains sparse. We used an PR:PROJECT_SUMMARY untargeted metabolomic approach to better understand the dynamic metabolic PR:PROJECT_SUMMARY changes to fibroblasts in response to 3 viral dosages, across 4 time points PR:PROJECT_SUMMARY post-infection. Profound shifts were seen in cysteine, purine, and unsaturated PR:PROJECT_SUMMARY fatty acid metabolites. This analysis provides a global perspective and PR:PROJECT_SUMMARY highlights previously underappreciated aspects of how human adenovirus alters PR:PROJECT_SUMMARY host metabolism. PR:INSTITUTE University of California, Merced PR:LAST_NAME SANCHEZ PR:FIRST_NAME BAILEY-J PR:ADDRESS 5200 North Lake Road, MERCED, CALIFORNIA, 95343, USA PR:EMAIL Bsanchez59@ucmerced.edu PR:PHONE 559-978-3565 PR:FUNDING_SOURCE USDA HSI Education Training grant (2021-03397) PR:DOI http://dx.doi.org/10.21228/M8MV7R #STUDY ST:STUDY_TITLE Untargeted metabolomics of Human embryonic kidney cells (HEK293) infected by ST:STUDY_TITLE Human adenovirus serotype 5 during early and late infection. ST:STUDY_SUMMARY Human adenoviruses overtake the DNA replication machinery of the infected host, ST:STUDY_SUMMARY rewiring mitotic events. Infection leads to the elevations in glucose and ST:STUDY_SUMMARY glutamine consumption rates, while also increasing lactate production rate. ST:STUDY_SUMMARY Fibroblast lineages are normally quiescent cells that display a repertoire of ST:STUDY_SUMMARY responses to certain agonists. Data on the shifts in fibroblast metabolism in ST:STUDY_SUMMARY response to human adenoviral infection are lacking. Specifically, knowledge ST:STUDY_SUMMARY pertaining to metabolic shifts aside from those involved in glycolytic ST:STUDY_SUMMARY metabolism after human adenoviral infection remains sparse. We used an ST:STUDY_SUMMARY untargeted metabolomic approach to better understand the dynamic metabolic ST:STUDY_SUMMARY changes to fibroblasts in response to 3 viral dosages, across 4 time points ST:STUDY_SUMMARY post-infection. Cells were infected for the following periods: 6, 12, 24, and 36 ST:STUDY_SUMMARY hours. Noninfected cells cultured for 24 hours were used as a negative control. ST:STUDY_SUMMARY Cells were subjected to the following viral dosages: 0.5, 1.0, and 2.0 ST:STUDY_SUMMARY multiplicity of infection (MOI) and 6 replicates were used for each experimental ST:STUDY_SUMMARY condition. Cellular pellets were collected at each time point following the ST:STUDY_SUMMARY removal of media. Samples were sent to the UC Davis Metabolomics Core for ST:STUDY_SUMMARY analysis of primary carbons using GC-TOF-MS. Profound shifts were seen in ST:STUDY_SUMMARY cysteine, purine, and unsaturated fatty acid metabolites. This analysis provides ST:STUDY_SUMMARY a global perspective and highlights previously underappreciated aspects of how ST:STUDY_SUMMARY human adenovirus alters host metabolism. ST:INSTITUTE University of California, Merced ST:LAST_NAME Sanchez ST:FIRST_NAME Bailey-J ST:ADDRESS 5200 Lake Rd, Merced, CA 95343 ST:EMAIL Bsanchez59@ucmerced.edu ST:PHONE 5599783565 ST:SUBMIT_DATE 2024-12-20 #SUBJECT SU:SUBJECT_TYPE Cultured cells SU:SUBJECT_SPECIES Homo sapiens SU:TAXONOMY_ID 9606 SU:CELL_BIOSOURCE_OR_SUPPLIER American Type Culture Collection SU:CELL_STRAIN_DETAILS Human embryonic kidney (HEK293) cells (RRID:CVCL_0045) SU:CELL_COUNTS 1.0 x 10^6/mL #SUBJECT_SAMPLE_FACTORS: SUBJECT(optional)[tab]SAMPLE[tab]FACTORS(NAME:VALUE pairs separated by |)[tab]Additional sample data SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - HuAdV_0.5MOI_12HPI_A Dose:0.5 MOI | Time:12HPI | Sample source:HEK293_HAdV5 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - HuAdV_0.5MOI_12HPI_B Dose:0.5 MOI | Time:12HPI | Sample source:HEK293_HAdV5 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - HuAdV_0.5MOI_12HPI_C Dose:0.5 MOI | Time:12HPI | Sample source:HEK293_HAdV5 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - HuAdV_0.5MOI_12HPI_D Dose:0.5 MOI | Time:12HPI | Sample source:HEK293_HAdV5 SUBJECT_SAMPLE_FACTORS - 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Cell CO:COLLECTION_SUMMARY media was removed, cells were washed with PBS, and mechanically scraped into CO:COLLECTION_SUMMARY pre-chilled collection tubes. Cellular pellets were collected at each time point CO:COLLECTION_SUMMARY following the removal of media, washing with 2 mL of phosphate buffered saline CO:COLLECTION_SUMMARY (PBS), and subsequent cell scraping. Once collected into pre-chilled, 2 mL CO:COLLECTION_SUMMARY microcentrifuge tubes, cells were centrifuged at 1000 g for 5 min, excess PBS CO:COLLECTION_SUMMARY was removed, and the pellets were stored in -80.0 oC. Samples were frozen in -80 CO:COLLECTION_SUMMARY until metabolomic processing. CO:SAMPLE_TYPE HEK cells CO:STORAGE_CONDITIONS -80â #TREATMENT TR:TREATMENT_SUMMARY Cells were treated with human adenovirus serotype 5 at the following dosages: TR:TREATMENT_SUMMARY 0.5, 1.0, and 2.0 multiplicity of infection. Virus was added to each well TR:TREATMENT_SUMMARY containing HEK293 cells after cells were washed with PBS and administered base TR:TREATMENT_SUMMARY media (DMEM) without FBS. Durations of infection were: 6, 12, 24, and 36 hours. TR:TREATMENT Viral infection TR:TREATMENT_DOSE 0.5, 1.0, 2.0 MOI TR:CELL_MEDIA DMEM + 10% FBS TR:CELL_ENVIR_COND 37 degree celsius incubator, 5% CO2 #SAMPLEPREP SP:SAMPLEPREP_SUMMARY Once samples were frozen, they were placed in -80 degree celsius freezer. SP:SAMPLEPREP_SUMMARY Samples were then processed at the UC Davis Metabolomics Core for primary carbon SP:SAMPLEPREP_SUMMARY metabolomics. SP:SAMPLEPREP_PROTOCOL_FILENAME GC-TOF-MS_sample_preparation_UCD_Fiehn_lab.pdf #CHROMATOGRAPHY CH:METHODS_FILENAME UCD_Fiehn_laboratory_GCTOF_MS.pdf; CH:METHODS_FILENAME GC-TOF-MS_sample_preparation_UCD_Fiehn_lab.pdf CH:INSTRUMENT_NAME Leco Pegasus IV GC CH:COLUMN_NAME Restek Rtx-5Sil MS (30m x 0.25mm, 0.25um) CH:COLUMN_TEMPERATURE Programmed temperature gradient: 50-330°C CH:FLOW_GRADIENT - CH:FLOW_RATE 1 mL min-1 CH:INJECTION_TEMPERATURE 50°C ramped to 250°C by 12°C s -1 CH:SOLVENT_A - CH:SOLVENT_B - CH:CHROMATOGRAPHY_TYPE GC #ANALYSIS AN:ANALYSIS_TYPE MS AN:ANALYSIS_PROTOCOL_FILE UCD_Fiehn_laboratory_GCTOF_MS.pdf #MS MS:INSTRUMENT_NAME Leco Pegasus IV TOF MS:INSTRUMENT_TYPE GC-TOF MS:MS_TYPE EI MS:MS_COMMENTS A Leco Pegasus IV TOF MS is used with unit mass resolution at 17 spectra s-1 MS:MS_COMMENTS from 80-500 Da at -70 eV ionization energy and 1800 V detector voltage with a MS:MS_COMMENTS 230°C transfer line and a 250°C ion source. MS:ION_MODE POSITIVE #MS_METABOLITE_DATA MS_METABOLITE_DATA:UNITS peak height MS_METABOLITE_DATA_START Samples HuAdV_0.5MOI_12HPI_A HuAdV_0.5MOI_12HPI_B HuAdV_0.5MOI_12HPI_C HuAdV_0.5MOI_12HPI_D HuAdV_0.5MOI_12HPI_E HuAdV_0.5MOI_12HPI_F HuAdV_0.5MOI_24HPI_A HuAdV_0.5MOI_24HPI_B HuAdV_0.5MOI_24HPI_C HuAdV_0.5MOI_24HPI_D HuAdV_0.5MOI_24HPI_E HuAdV_0.5MOI_24HPI_F HuAdV_0.5MOI_36HPI_A HuAdV_0.5MOI_36HPI_B HuAdV_0.5MOI_36HPI_C HuAdV_0.5MOI_36HPI_D HuAdV_0.5MOI_36HPI_E HuAdV_0.5MOI_6HPI_A HuAdV_0.5MOI_6HPI_B HuAdV_0.5MOI_6HPI_C HuAdV_0.5MOI_6HPI_D HuAdV_0.5MOI_6HPI_E HuAdV_0.5MOI_6HPI_F HuAdV_1.0MOI_12HPI_A HuAdV_1.0MOI_12HPI_B HuAdV_1.0MOI_12HPI_C HuAdV_1.0MOI_12HPI_D HuAdV_1.0MOI_12HPI_E HuAdV_1.0MOI_12HPI_F HuAdV_1.0MOI_24HPI_A HuAdV_1.0MOI_24HPI_B HuAdV_1.0MOI_24HPI_C HuAdV_1.0MOI_24HPI_D HuAdV_1.0MOI_24HPI_E HuAdV_1.0MOI_24HPI_F HuAdV_1.0MOI_36HPI_A HuAdV_1.0MOI_36HPI_B HuAdV_1.0MOI_36HPI_C HuAdV_1.0MOI_36HPI_D HuAdV_1.0MOI_36HPI_E HuAdV_1.0MOI_36HPI_F HuAdV_1.0MOI_6HPI_A 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